Новости

Javascript в настоящее время отключен в вашем браузере.Некоторые функции этого веб-сайта не будут работать, если JavaScript отключен.
Зарегистрируйтесь, указав свои конкретные данные и конкретный интересующий препарат, и мы сопоставим предоставленную вами информацию со статьями в нашей обширной базе данных и немедленно отправим вам копию в формате PDF по электронной почте.
Дин Цзиннуо, Чжао Вэйфэн, отделение инфекционных заболеваний, Первая дочерняя больница Университета Сучжоу, город Сучжоу, провинция Цзянсу, 215000 Тел.опухоли органов пищеварения с 5-летней общей выживаемостью 14,1%.Многие пациенты с ГЦК диагностируются на поздних стадиях, поэтому ранний скрининг необходим для снижения смертности от ГЦК.В дополнение к обычно используемым индикаторам обнаружения, таким как сывороточный альфа-фетопротеин (AFP), лектин-реактивный альфа-фетопротеин хрусталика (AFP-L3) и аномальный протромбин (белок II, индуцированный дефицитом витамина К, PIVKA-II), методы жидкостной биопсии Было показано, что он имеет диагностическое значение при обнаружении ГЦК.По сравнению с инвазивными процедурами жидкостная биопсия позволяет обнаружить циркулирующие злокачественные метаболиты.Методы жидкостной биопсии обнаруживают циркулирующие опухолевые клетки, циркулирующую ДНК опухоли, циркулирующую РНК и экзосомы и используются для раннего скрининга, диагностики и прогностической оценки ГЦР.В этой статье рассматривается молекулярная биология и применение различных методов жидкостной биопсии для выделения многообещающих биомаркеров, которые могут быть жизнеспособными вариантами ранней оценки ГЦК для улучшения раннего скрининга групп высокого риска ГЦК.Ключевые слова: метод жидкостной биопсии, гепатоцеллюлярная карцинома, группа высокого риска.
Гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) — распространенная злокачественная опухоль пищеварительного тракта, занимающая шестое место среди новых случаев злокачественных опухолей как у мужчин, так и у женщин.1 Во всем мире рак печени является третьей ведущей причиной смерти от рака после рака легкого и колоректального рака, на его долю приходится 8,3% смертей, связанных с раком, от всех злокачественных новообразований.1 Прогноз ГЦР тесно связан со стадией на момент постановки диагноза.Основными причинами плохой выживаемости при ГЦК являются внутрипеченочные метастазы, опухолевые тромбы портальных вен и отдаленные метастазы, препятствующие резекции, и многие из этих характеристик уже присутствуют у пациентов на момент постановки диагноза.
Согласно руководствам по диагностике и лечению, основными факторами риска развития ГЦК являются цирроз печени, хроническая инфекция вируса гепатита В (ВГВ) или вируса гепатита С (ВГС), алкогольная жировая болезнь печени и неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП). ).2 Кроме того, факторы риска развития ГЦК включают потребление загрязненной афлатоксином пищи, шистосомоз, другие причины цирроза печени, семейный анамнез рака печени, диабет, ожирение, курение и лекарственное поражение печени.35- и 45-летние группы высокого риска должны проходить регулярные медицинские осмотры.Ранний скрининг является важной стратегией раннего лечения для улучшения общей выживаемости пациентов с ГЦР.
Биомаркеры, такие как АФП, АФП-L3 и PIVKA-II, рекомендуются для раннего скрининга ГЦК3,4.Методы жидкостной биопсии показали многообещающие результаты в ранней диагностике и оценке лечения.5,6 Значительный прогресс был достигнут в жидкостной биопсии ГЦК, которая может иметь более высокую чувствительность и специфичность, чем обычно используемые сывороточные маркеры, такие как АФП (таблица 1).
АФП является широко используемым биомаркером при ГЦК и в настоящее время является наиболее подробным биомаркером, широко используемым для раннего скрининга, диагностики и оценки заболевания.Постоянно повышенный уровень АФП считается фактором риска прогрессирования ГЦК.7,8 Частота обнаружения мелкой гепатоцеллюлярной карциномы (sHCC) увеличивается с развитием ультразвука и компьютерной томографии, и было обнаружено, что AFP особенно нечувствителен к обнаружению hHCC в клинической практике.Согласно ретроспективному многоцентровому исследованию9, положительный результат на АФП был обнаружен в 46% (616/1338) случаев ГЦР и 23,4% (150/641) случаев сГЦК.Кроме того, уровни АФП повышены у пациентов с хроническими заболеваниями печени и циррозом.10 Таким образом, АФП имеет ограниченный скрининговый эффект на sHCC.11 Согласно Азиатско-Тихоокеанскому руководству по клинической практике лечения гепатоцеллюлярной карциномы, использование АФП не рекомендуется.12 Клинические данные свидетельствуют о том, что PIVKA-II превосходит АФП при лечении ГЦК и что комбинация PIVKA-II и АФП более высокая диагностическая ценность при ГЦК.13 По сравнению с биопсией ткани жидкостная биопсия в первую очередь выявляет связанные с опухолью метаболиты в жидкостях организма (кровь, слюна, плевральная жидкость, спинномозговая жидкость или моча) и является менее инвазивной для тканей.14 Кроме того, жидкие биопсии могут отражать злокачественные признаки, отсутствующие в первичной опухолевой ткани.15 Жидкие биопсии еще не апробированы в клинической практике при всех видах опухолей, но их диагностический потенциал при раке привлекает внимание онкологов.16 Жидкостная биопсия позволяет обнаружить циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК), циркулирующую опухолевую ДНК (кДНК), циркулирующую свободную РНК (вкРНК) и экзосомы.В этой статье мы обсудим характеристики, роль и применение различных методов жидкостной биопсии в раннем скрининге групп высокого риска ГЦР.
Внеклеточная ДНК (вкДНК) в образцах крови здоровых людей была впервые описана в 1948 г. Mandel et al.17 вкДНК представляет собой бесклеточный фрагмент ДНК длиной примерно 160–180 п.н., происходящий в основном из лимфоцитов и миелоидных клеток.цтДНК представляет собой специфический мутантный фрагмент ДНК, высвобождаемый опухолевыми клетками в периферическую кровь, который представляет собой геномную информацию опухолевых клеток после определенных патофизиологических процессов, включая некроз, апоптоз и экскрецию.Доля кДНК в общей вкДНК широко варьирует в зависимости от типа опухоли, и, как сообщается, фрагменты кДНК обычно имеют длину менее 167 п.н.18 Исследование Андерхилла показало, что фрагменты вкДНК обычно короче, чем нормальные вкДНК.19 По сравнению со здоровыми людьми общая длина фрагментов вкДНК в крови больных раком короче, поэтому вкДНК можно использовать в качестве индикатора раннего скрининга опухолей.Обогащение некоторых подмножеств длин фрагментов вкДНК может улучшить обнаружение кДНК, связанной с неметастатическими солидными опухолями.Исследования показали, что цтДНК обнаруживается более чем в 75% запущенных случаев рака поджелудочной железы, толстой кишки, мочевого пузыря, желудочно-кишечного тракта, печени, яичников, молочной железы, меланомы и рака головы и шеи.20,21 Однако количество ctDNA в крови зависит от локализации опухоли.22 В исследовании Bettegoud у пациентов с колоректальным раком, раком молочной железы, печени, легких и предстательной железы был обнаружен более высокий уровень кДНК в крови, чем при других видах рака.Напротив, у пациентов с раком полости рта, раком поджелудочной железы, раком желудка и глиомой концентрация кДНК в крови была ниже.двадцать один
Поскольку кДНК содержит те же генетические мутации, что и первичные опухолевые клетки, кДНК можно использовать для обнаружения гетерогенных опухолеспецифических мутаций и эпигенетических изменений, включая метилирование, гидроксиметилирование, вариации отдельных нуклеотидов и вариации числа копий.двадцать три
Метилирование ДНК является одним из наиболее распространенных эпигенетических изменений, приводящих к репрессии генов.По сравнению с нормальными клетками существуют различия в общем уровне метилирования генома опухолевых клеток, особенно в метилировании генов-супрессоров опухолей, которые можно обнаружить на ранней стадии, что позволяет предположить, что изменения в метилировании ДНК могут быть индикатором раннего выявление онкогенеза.Гены-супрессоры опухолей, связанные с HCC, могут быть инактивированы путем метилирования промотора, тем самым стимулируя онкогенез.24 Метилирование ДНК является идеальным маркером для ранней диагностики опухолей благодаря его тканевой специфичности, выявляемости и независимости от возраста.Кроме того, метилирование ДНК более распространено по сравнению с соматическими мутациями, поскольку в каждой области генома-мишени имеется больше областей-мишеней и несколько измененных CpG-сайтов.25 В дополнение к множеству сайтов CpG большое количество независимых гиперметилированных локусов в ctDNA было идентифицировано в DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 и RGS10.26 Xu et al.Сравнение образцов вкДНК от 1098 пациентов с ГЦР и 835 здоровых контролей показало, что гены, связанные с ГЦК, сильно коррелируют с соответствующими сигнатурами метилирования кДНК в плазме.25 На основе лабораторного анализа была разработана прогностическая модель, содержащая 10 маркеров метилирования с чувствительностью и специфичностью 85,7% и 94,3% соответственно, и эти маркеры сильно коррелировали с массой опухоли, стадией опухоли и ответом на лечение.Эти результаты показывают, что использование маркеров метилирования кДНК имеет большие перспективы в диагностике, мониторинге и прогнозировании ГЦК.В модели метилирования, состоящей из трех аберрантно метилированных генов (APC, COX2, RASSF1A) и одной миРНК (miR203), представленной Lu et al27, чувствительность и специфичность модели 27 для диагностики ГЦК, связанного с HBV, были сопоставимы.80%.Кроме того, модель могла обнаружить 75% недиагностированных пациентов с ГЦК с уровнем АФП 20 нг/мл.Ген белка Ras-ассоциированного домена семейства 1A (RASSF1A) представляет собой основную повторяющуюся последовательность ДНК в геноме человека.Араужо и др.пришел к выводу, что гиперметилирование промотора RASSF1A может быть ценным биомаркером для раннего скрининга HCC и потенциальной молекулярной мишенью для эпигенетической терапии.28 В одном исследовании гиперметилирование промотора RASSF1A в сыворотке было обнаружено у 73,3% пациентов с ГЦК.29 Длинный вкрапленный нуклеотидный элемент 1 (LINE-1) является другим высокоактивным медиатором ретротранспозиции.Гипометилирование LINE-1 было обнаружено в ДНК 66,7% образцов сыворотки ГЦК и было связано с ранним рецидивом и плохой выживаемостью после радикальной резекции.29 Гиперметилирование — распространенный генетический процесс, играющий уникальную роль в развитии цирроза печени и ГЦК.30 Напротив, гидроксиметилирование представляет собой процесс деметилирования, который индуцирует реактивацию и экспрессию генов, и обнаружение продукта 5-гидроксиметилцитозина (5-hmC) в этом процессе можно использовать для идентификации опухоли.Метилирование и гидроксиметилирование кДНК связаны с онкогенезом и могут способствовать раннему скринингу ГЦК.В исследовании с участием 2554 человек в образцах вкДНК был обнаружен 31 полногеномный 5-hmC, а 32 гена были идентифицированы путем сравнения последовательностей 5-hmC у пациентов с ГЦК и в группах высокого риска, таких как люди с хроническими заболеваниями.Диагностические модели заболеваний печени.и цирроз.Эта модель превосходила АФП в различении ГЦР от неопухолевой ткани.
Мутации в кодирующих областях могут привести к аномалиям транскрипции, что может привести к изменениям в последовательностях белков и, в конечном итоге, к раку.Однонуклеотидные варианты являются важными геномными маркерами для раннего скрининга опухолей из-за их высокой тканевой надежности и высокой опухолевой и тканевой специфичности.Многочисленные исследования, связанные с ГЦК, с использованием секвенирования нового поколения (NGS) для секвенирования экзома и всего генома рака выявили распространенные мутантные клеточные гены, такие как TP53 и CTNNB1, а также несколько, включая ARID1A, MLL, IRF2.Новые гены, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 и JAK1, демонстрируют умеренную частоту мутаций. Анализ функции мутантного гена предполагает, что изменения в ремоделировании хроматина, передаче сигнала Wnt/β-катенина и JAK/STAT, пути клеточного цикла P53, эпигенетических модификаторах, путях окислительного стресса, пути PI3K/AKT/MTOR и RAS/RAF/ Путь киназы MAPK играет решающую роль в онкогенезе ГЦК.32,33 В исследовании, в котором были обнаружены мутации, связанные с опухолью, Huang et al. обнаружили, что частота связанных с опухолью мутаций, зависящих от ctDNA, составляла 19,5%, а специфичность - 90%. .34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДНК (P=0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P<0,001). Анализ функции мутантного гена предполагает, что изменения в ремоделировании хроматина, передаче сигнала Wnt/β-катенина и JAK/STAT, пути клеточного цикла P53, эпигенетических модификаторах, путях окислительного стресса, пути PI3K/AKT/MTOR и RAS/RAF/ Путь киназы MAPK играет решающую роль в онкогенезе ГЦК.32,33 В исследовании, в котором были обнаружены мутации, связанные с опухолью, Huang et al. обнаружили, что частота связанных с опухолью мутаций, зависящих от ctDNA, составляла 19,5%, а специфичность - 90%. .34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДНК (P=0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P<0,001).Анализ функции мутантного гена предполагает, что изменения в ремоделировании хроматина, передаче сигналов Wnt/β-катенина и JAK/STAT, пути клеточного цикла P53, эпигенетических модификаторах, путях окислительного стресса, пути PI3K/AKT/MTOR и пути киназы RAS/RAF/MAPK играют роль решающую роль в онкогенезе ГЦК.32,33 В исследовании, в котором были обнаружены мутации, связанные с опухолью, Huang et al.обнаружили, что частота цтДНК-зависимых опухолеассоциированных мутаций составила 19,5%, а специфичность — 90%..34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДНК (P=0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P<0,001). .34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией было больше мутаций кДНК (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001).Функциональный анализ мутантных генов выявил ремоделирование хроматина, передачу сигналов Wnt/β-катенин и JAK/STAT, путь клеточного цикла P53, эпигенетические модификаторы, путь окислительного стресса, путь PI3K/AKT/MTOR и RAS/RAF/MAPK. Киназный путь играет решающую роль в онкогенезе ГЦК. 32,33 在 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 研究 中 ， huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 Ctdna 的 为 为 19,5% ， 为 为 90% .34突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0.001）。 32.33 在 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， huang 等 肿瘤 相关 依赖于 依赖于 Ctdna 的 为 为 19,5% ， 为 为 90% .34 此外 经历 血管 的 更 可能 发生 Ctdna 突变 （（）） 更 的 可能 发生 发生 突变 突变 （） 的 更 可能 可能 发生 发生 可能短的无复发生存期（P<0,001）。32,33 В исследовании, обнаружившем связанные с опухолью мутации, Huang et al.обнаружили, что ассоциированные с опухолью мутации на 19,5% зависят от кДНК со специфичностью 90% [34]. Кроме того, у пациентов, перенесших сосудистую инвазию, более вероятно развитие кДНК.мутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). мутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001).Другим распространенным драйверным геном HCC является TP53, частота мутаций которого превышает 30%.Исследования показали, что частота мутаций TP53 в ctDNA в крови и моче колеблется от 5% до 60%.35 Исследование Йохана показало, что спектр мутаций цтДНК при позднем ГЦК имеет такую ​​же частоту мутаций, что и ранний ГЦК, включая промотор TERT (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), мутации в АКСИН1 ., ARID2, KMT2D и TSC2 (по 6%).36 Онкоген β-catenin (CTNNB1) играет важную роль в пути передачи сигналов Wnt.Коактиватор транскрипции CTNNB1 может способствовать экспрессии генов, что может приводить к пролиферации клеток, ингибированию апоптоза и ангиогенезу.CTNNB1 также может взаимодействовать с TERT, вызывая трансформацию гепатоцитов.33 Промотор TERT часто мутирует в некоторых солидных опухолях.Изменения в TERT, одном из самых ранних генетических изменений при злокачественной трансформации ГЦК, могут приводить к реактивации теломеразы в цирротических гепатоцитах и ​​могут способствовать пролиферации и предотвращать старение.Сообщалось, что мутации в промоторе 33-37 TERT встречаются у 59-90% пациентов с пролиферативными узлами печени и ранним ГЦК и связаны с выживаемостью.38
Изменения числа копий (CNA) являются важным подтипом соматических мутаций.Исследования показали, что широко распространенное и очаговое бремя CNA представляет собой геномную сигнатуру, способную предсказать иммунную инфильтрацию и исключение опухоли при некоторых типах рака.39 Активная инфильтрационная сигнализация, высокая цитолитическая активность, тяжелое воспаление и генетические маркеры, связанные с презентацией антигена при ГЦК.Анализ массива данных однонуклеотидных полиморфизмов у 477 человек выявил низкую нагрузку на ЦНС.Напротив, хромосомно нестабильные опухоли с высокой экстенсивной нагрузкой CNA демонстрировали признаки иммунного отторжения и были связаны с пролиферацией, репарацией ДНК и дисфункцией TP53.Сюй и др.показали, что группа с ГЦР имела более высокие баллы CNA, чем группа с хроническим заболеванием печени.40 Используя секвенирование всего генома одной клетки, было обнаружено, что CNA появляются на ранних стадиях гепатоканцерогенеза и остаются относительно стабильными во время прогрессирования опухоли.41 Чанг и др.обнаружили, что уровни вкДНК были значительно повышены у пациентов с ГЦК и что полногеномные CNA во вкДНК были важным независимым прогностическим маркером у пациентов с ГЦК, получавших сорафениб.42 Пациенты с более высоким бременем CNA были более склонны к прогрессированию заболевания и смерти, чем пациенты с более низким бременем CNA.Оллерих и др.обнаружили, что индекс нестабильности числа копий (CNI) можно использовать для оценки CNA во вкДНК больных раком.Они отметили, что пациенты с запущенным раком имели значительно более высокие показатели CNI, чем контрольная группа, которая оценивает реакцию пациента на системную химиотерапию и иммунотерапию.43 Эти результаты позволяют предположить, что CNA, обнаруженные в образцах жидкой биопсии, могут служить прогностическими индикаторами у пациентов с распространенным раком.ГЦК на фоне системной терапии.
В настоящее время методы, используемые для обнаружения ctDNA, можно разделить на целевые и нецелевые.Вкратце, целевые методы, такие как цифровая полимеразная цепная реакция (dPCR), цифровая ПЦР BEAMing, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq и Tam-Seq, высокочувствительны к предопределенным генам.Нецелевые методы, такие как секвенирование всего генома и NGS, обеспечивают комплексное представление всего геномного ландшафта.44 По сравнению с целевыми панелями полногеномное секвенирование может обнаруживать не только точечные мутации и вставки, но также перестройки и вариации числа копий.прогноз, а ЦОК и вкДНК являются хорошими индикаторами, которые можно использовать для динамического мониторинга ГЦК.45 Кроме того, анализ вкДНК может быть более полезным для выявления ГЦР.Ян и др.показали, что вкДНК в плазме пациентов с ГЦК была значительно выше, чем у пациентов с фиброзом печени и у здоровых людей.Ожидается, что по сравнению с АФП цтДНК будет лучшим скрининговым маркером раннего ГЦК.46 В проспективном исследовании 47 жидких биоптатов, в которых тестировали вкДНК и белок в популяционной популяции, было показано, что они эффективны для дифференциации пациентов с ГЦР от пациентов без ГЦР.В последующем наблюдении за 331 ультразвуковым нормальным и АФП-отрицательным пациентом чувствительность и специфичность вкДНК для диагностики ГЦК составляли 100% и 94% соответственно, поэтому кДНК могла обнаруживать ГЦК у бессимптомных серопозитивных по HBsAg лиц.В исследовании Yeo48 у пациентов с ГЦК обнаружена высокая частота (92,5%) гиперметилирования промотора RASSF1A.Кроме того, Сюй и соавт.создали диагностическую модель для прогнозирования ГЦР с использованием панели специфических маркеров метилирования со специфичностью и чувствительностью 90,5% и 83,3% соответственно.Панель позволяет отличить пациентов с ГЦК от пациентов с другими заболеваниями печени, что лучше, чем АФП.Они также обнаружили, что нормальные контроли, которые дали положительный результат, могут иметь факторы риска ГЦК, такие как инфекция ВГВ или употребление алкоголя в анамнезе.25 Мы предполагаем, что факторы высокого риска ГЦК могут способствовать гиперметилированию вкДНК, что затем способствует прогрессированию ГЦК, и, таким образом, вкДНК может играть ключевую роль в скрининге групп высокого риска.Кай и др.обобщить весь спектр мутаций ctDNA и предложить надежную стратегию для оценки опухолевой нагрузки у пациентов.49 Эта стратегия может идентифицировать онкогенез в среднем за 4,6 месяца до изменения визуализации и показала превосходную диагностическую эффективность по сравнению с сывороточными биомаркерами AFP, AFP-L3 и PIVKA-II.Диагностическая ценность тестирования кДНК была продемонстрирована, когда оценка изображений недоступна, поэтому тестирование кДНК имеет значение в диагностике раннего ГЦК в группах высокого риска.Недавно ученые использовали технологию NGS для анализа показателей многовариантной генетической изменчивости (включая 5-гидроксиметилцитозин, 5'-мотив, фрагментацию, нуклеосомный след, HIFI) в 3204 клинических образцах и вкДНК.50 Ревалидированные модели HIFI с тремя независимыми обучающими, тестовыми и тестовыми наборами показали стабильное и надежное различение между популяциями ГЦР и не-ГЦК с чувствительностью 95,79% и 95,42% в тесте и наборах тестов, специфичных для ГЦК, соответственно.Полы составили 95,00% и 97,83% соответственно.Диагностическая ценность метода HIFI выше, чем у АФП, при дифференциации ГЦР от цирроза.Кроме того, цДНК также используется в хирургическом лечении.Ацуши и др.определили предоперационные уровни кДНК в сыворотке у пациентов с ГЦР и обнаружили, что частота рецидивов и частота внепеченочных метастазов в группе с положительной кДНК были значительно выше, чем в группе с отрицательной кДНК, а уровни кДНК значительно коррелировали.с опухолевой прогрессией.51 Являясь высокочувствительным биомаркером, цтДНК может предсказывать способность ГЦК проникать в сосуды.Ван и др.выполнили полногеномное секвенирование 46 пациентов с ГЦР, и многофакторный анализ показал, что пороговое значение частоты аллеля варианта кДНК для инвазии в микрососуды составляет 0,83%, чувствительность 89,7% и специфичность 80,0%.независимый фактор риска микрососудистой инвазии при резектабельном ГЦК, предполагая, что кДНК может помочь в выборе оптимального лечения.В заключение, цтДНК полностью вовлечена в возникновение и развитие ГЦК и может использоваться для раннего скрининга, хирургической оценки и мониторинга заболевания.
ЦОК представляют собой злокачественные клетки, происходящие из первичных опухолей или метастазов, которые метастазируют в кровоток.Опухолевые клетки секретируют матриксные металлопротеиназы (ММП), которые разрушают базальную мембрану, позволяя опухолевым клеткам напрямую проникать в кровеносные и лимфатические сосуды.Однако большинство ЦОК быстро элиминируются аноикисом, иммунной атакой или сдвиговым напряжением.53 Эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) позволяет ЦОК легко выделяться из ткани первичной опухоли, проникать в капилляры и приобретать значительно улучшенную выживаемость, метастазирование, инвазивность и лекарственную устойчивость.Исследования показали, что существует глубокая гетерогенность среди различных опухолевых клеток в первичных метастатических опухолях.Таким образом, анализ ЦОК может привести к всестороннему пониманию гетерогенности опухолевых клеток.54
Специфические маркеры для ЦОК, связанных с ГЦР, включают глипикан-3 (GPC3), рецептор асиалогликопротеина (ASGPR), молекулу адгезии эпителиальных клеток (EpCAM) и маркеры, ассоциированные со стволовыми клетками, такие как CD44, CD90, 55 и молекула межклеточной адгезии 1 (ICAM1).) .56 Маркер GPC3 представляет собой заякоренный в клеточной мембране белок, который клинически используется для патологического анализа и характеристики ГЦР.57 Экспрессия GPC3 чаще встречается в опухолевых клетках ГЦК с промежуточной и низкой степенью дифференцировки и способствует внепеченочной миграции;кроме того, наличие ЦОК GPC3+ указывает на метастатическую ГЦК.58 ASGPR представляет собой трансмембранный белок, экспрессируемый только на поверхности гепатоцитов, и его экспрессия в высокой степени наблюдается при высокодифференцированном ГЦР.EpCAM является одним из наиболее часто используемых ассоциированных с мембраной белков для захвата ЦОК.EpCAM был идентифицирован как поверхностный маркер клеток ГЦК с характеристиками стволовых клеток,59 что коррелирует с различными клинико-патологическими особенностями ГЦК, такими как сосудистая инвазия, оцененные уровни АФП и поздняя стадия рака печени в больнице Барселоны (BCLC).Фенотип 60 CTC EMT является сильно метастатическим.54 Процессы ЕМТ в ЦОК способствуют метастазированию ГЦК.Экспрессия маркеров EMT, таких как виментин, твист, связывание цинковых пальцев E-box (ZEB) 1, ZEB2, snail, slug и E-cadherin, была изучена в ЦОК, полученных из печени, у пациентов с ГЦК.58 Система CanPatrol™, разработанная Cheng [61], классифицировала ЦОК на три фенотипические подгруппы на основе преимущественно экспрессируемых маркеров: эпителиальный фенотип (EpCAM, CK8/18/19), мезенхимальный фенотип (виментин, спиральный) и смешанные фенотипы.У 176 пациентов общий ЦОК превосходил АФП при дифференциации ГЦК от доброкачественного заболевания печени.Значения AUC для общего количества ЦОК, АФП и комбинированного общего количества ЦОК и АФП составляли 0,774 (95% ДИ, 0,704–0,834), 0,669 (95% ДИ, 0,587–0,750) и 0,821 (95% ДИ, 0,756–0,886). ).), соответственно.Классификация ЦОК, основанная на ЕМТ, может предсказать диагноз ГЦК, ранний рецидив, метастазирование и более короткое общее время.
В настоящее время методы обнаружения РСК включают физические методы и биологические методы.Физические методы, часто называемые обогащением на основе биофизических свойств, в основном зависят от физических свойств CSC, таких как размер, плотность, заряд, подвижность и деформируемость.В зависимости от физических свойств существуют различные методы, такие как системы на основе фильтрации, диэлектрофорез и т. д. Последний, также известный как обогащение на основе иммуноаффинности, в основном основан на связывании антиген-антитело, поскольку в этом методе используются антитела против опухолеспецифических биомаркеров. такие как EpCAM, ASGPR, рецептор 2 эпидермального фактора роста человека (HER2), специфический антиген простаты (PSA), панцитокератин человека (P-CK) и карбамоилфосфатсинтаза 1 (CPS1).62 Другой тип, называемый методом без обогащения, использует проточную цитометрию для дифференциации ЦОК от лейкоцитов на основе более высокого соотношения ядер и цитоплазмы и их размера.В настоящее время единственным одобренным FDA тестом для обнаружения ЦОК является система Cell-Search™, в которой используется маркер клеточной поверхности EpCAM. Тем не менее, комбинированное обнаружение ЦОК на основе маркеров может увеличить уровень положительных результатов.54 Смесь антител против ASGPR и CPS1 позволила достичь уровня обнаружения ЦОК 91% у пациентов с ГЦР.63 Zhang et al. использовали CTC-Chip с антителами против ASGPR, P -CK и CPS1, а также отличали пациентов с ГЦК от пациентов с доброкачественными заболеваниями печени или не-ГЦК со скоростью 100%. частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. с высоким риском ГЦК. Тем не менее, комбинированное обнаружение ЦОК на основе маркеров может увеличить уровень положительных результатов.54 Смесь антител против ASGPR и CPS1 позволила достичь уровня обнаружения ЦОК 91% у пациентов с ГЦР.63 Zhang et al. использовали CTC-Chip с антителами против ASGPR, P -CK и CPS1, а также отличали пациентов с ГЦК от пациентов с доброкачественными заболеваниями печени или не-ГЦК со скоростью 100%. частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. с высоким риском ГЦК.Однако комбинированное обнаружение ЦОК на основе маркеров может увеличить процент положительных результатов.54 Смесь антител против ASGPR и CPS1 позволила достичь уровня обнаружения ЦОК 91% у пациентов с ГЦК.63 Zhang et al.использовали CTC-Chip с антителами против ASGPR, P-CK и CPS1, а также отличали пациентов с ГЦК от пациентов с доброкачественными заболеваниями печени или без ГЦК со скоростью 100%.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Го и соавторы связаны с тем, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у данного уровня АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и особенность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 групп. частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавт. обнаружили, что ПЦР, полученная из ЦОК, была повышена у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить выявление ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге. группы.с высоким риском ГЦК.Однако комбинированное выявление ЦОК на основе маркеров может увеличить процент положительных результатов.54 Смесь антител против ASGPR и CPS1 позволила достичь 91% уровня обнаружения ЦОК у пациентов с ГЦК.63 Чжан и др.использовали чипы CTC с антителами против ASGPR, P-CK и CPS1 и отличали пациентов с HCC от доброкачественных заболеваний печени и не-HCC со 100%.64 Исследование Wang идентифицировало 60% EpCAM+ ЦОК у 42 пациентов с ГЦР и обнаружило значительную корреляцию между частотой и количеством ЦОК на стадии TNM. 65 Guo 等 发现 ， 在 在 afp 水平 <20 нг/мл 的 125/171 (73%) 名 患者 中 ， CTC 衍生 的 PCR 评分 升高 敏感性 为 72,5%， 为 95,0%， 而 在≤ 20 нг/мл, ≤ 57,0 %, ≤ 90,0 %. 65 Guo 等 发现 在 在 在 水平 水平 <20 нг/мл 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， CTC 衍生 PCR 评分 ， 为 为 为 72,5%， 95,0%， afp 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 20 нг/мл 时 特异性 为 57,0% 和 90,0%。65 Гуо и др.Обнаружено, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность доли 20 нг/мл. обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл значения ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП имел пороговую специфичность. составлял 20 нг/мл.мл составила 57,0% и 90,0%.66 Комбинация ОВП и ЦОК улучшает обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК превосходят АФП при раннем скрининге групп высокого риска ГЦР.Таким образом, для CTC-позитивных групп и групп высокого риска HCC тестирование CTC следует рутинно сочетать с ультразвуковым исследованием и обнаружением ОВП.Тем не менее, ЦОК считаются важными предикторами метастазирования опухоли и рецидива, и обнаружение ЦОК не рекомендуется независимо в качестве диагностического инструмента.62 Таким образом, ЦОК может служить лучшим прогностическим биомаркером, чем другие используемые в настоящее время маркеры. Чжоу и др. обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Аналогичное исследование было проведено Zhong et al. 68. Кроме того, Qi обнаружил, что у 101 из 112 пациентов (90,81%) с ГЦК, в том числе с ранней стадией заболевания, были выявлены ЦОК, и что очень маленькие узлы ГЦК были обнаружены через 3 до 5 месяцев наблюдения. Чжоу и соавт. обнаружили, что у пациентов с повышенным числом ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким числом ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001) [67]. аналогичное исследование было сообщено Zhong et al. 68. Кроме того, Qi обнаружил, что 101 из 112 пациентов (90,81%) с ГЦК, включая пациентов с ранней стадией заболевания, были положительными на ЦОК, и что очень маленькие узлы ГЦК были обнаружены через 3–3 года. 5 месяцев наблюдения. Чжоу и др.Выявлено, что у пациентов с повышенным ростом ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким ростом ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou и соавт. обнаружили, что пациенты с повышенным уровнем ЦОК EpCAM+ и регуляторными Т-клетками имели более высокий риск рецидива ГЦК, чем пациенты с низким уровнем ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% против 10,3% (P<0,001)67.Аналогичное исследование было проведено Zhong et al.68. Кроме того, Qi обнаружил, что у 101 из 112 пациентов (90,81%) с ГЦК, в том числе с ранним заболеванием, были ЦОК, и что очень маленькие узлы ГЦК были обнаружены через 3–5 месяцев наблюдения. Zhou 等 发现 ， 与 Ctc 数量 较 的 患者 相比 相比 ， epcam+ ctc 和 调节性 t 细胞 数量 的 患者 发生 发生 hcc 复发 风险 更 高 ， 复发率 分别 66,7% 和 10,3% (р <0,001)。 复发率 为 66,7% 和 10,3% (р <0,001)。 Zhou 等 发现 与 与 Ctc 数量 少 患者 相比 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 更 ， 复发率 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为р <0,001)。。。。。。。。。。。。。。。 Чжоу и др.Частота рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным уровнем EpCAM+ ЦОК и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001).Об аналогичном исследовании сообщили Zhong et al.68 Кроме того, Qi обнаружил, что у 101 из 112 пациентов с ГЦК (90,81%), включая пациентов с ранним заболеванием, были положительные результаты ЦОК и обнаружены очень маленькие узлы ГЦК после 3 посещений.Наблюдение до 5 мес.Они также обнаружили ЦОК у 12 пациентов с хронической инфекцией ВГВ и обнаружили небольшие опухоли ГЦК в течение 5 месяцев у 2 ЦОК-положительных пациентов.69 Таким образом, ЦОК можно использовать для прогнозирования ГЦК, 70 но их можно использовать более рутинно в качестве прогностических биомаркеров.
Подобно вкДНК, вкРНК высвобождается в кровоток через различные системы.Эти молекулы в периферической крови представляют раковую ткань происхождения.По сравнению с маркерами, обнаруженными неинвазивными методами, cfRNAs более динамично регулируются, тканеспецифичны и распространены во внеклеточной среде.О значимости и диагностической ценности 71 миРНК (миРНК) при ГЦР сообщалось во многих исследованиях.миРНК представляют собой эндогенные некодирующие РНК (нкРНК), которые регулируют различные молекулярно-биологические активности путем ингибирования трансляции целевых матричных РНК (мРНК).микроРНК расположены в апоптотических тельцах, инкапсулированных в экзосомах, но они также могут стабильно связываться с белками сыворотки и липидами периферической крови и могут использоваться для оценки ГЦК.микроРНК участвуют в регенерации печени, метаболизме липидов, апоптозе, воспалении и развитии ГЦК.72 Онкогенные миРНК, такие как миР-21, миР-155 и миР-221, хорошо известны при ГЦК.В частности, miR-21 играет ключевую роль в синтезе коллагена во внеклеточном матриксе и фиброзе и способствует гепатокарциногенезу путем активации гемопоэтических стволовых клеток.72,73 Опухолесупрессорные миРНК при ГЦК включают миРНК-122, миРНК-29, семейство Let-7 и семейство миРНК-15.Семейство Let-7 состоит из многих микроРНК-супрессоров опухолей, которые нацелены на семейство RAS.Семейство miR-15 включает miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 и miR-497, которые имеют комплементарные последовательности для определенных мРНК.Кроме того, длинные некодирующие РНК (днРНК) и кольцевые РНК (цирРНК) также важны для раннего скрининга ГЦК.днРНК представляют собой самый широкий класс нкРНК, включая мРНК-подобные нкРНК, и участвуют в патогенезе многих заболеваний человека.LncRNAs играют регулирующую роль в микроокружении печени и хронических заболеваниях печени.74 CircRNAs также являются классом ncRNAs с множественными функциями в регуляции экспрессии генов.В последнее время circRNAs рассматривались как диагностические инструменты для HCC.
Циркулирующая свободная РНК обладает замечательной стабильностью, включая устойчивость к температуре, рН и РНКазе, что делает выделение фнРНК из периферической крови менее утомительным с использованием стандартных методов очистки РНК.Наиболее часто используемые методы включают NGS, микрочип и RT-qPCR.NGS позволяет измерять микроРНК по всему геному.Однако этот метод дорог, и анализ не стандартизирован.Напротив, RT-qPCR недорог, быстро амплифицирует нуклеиновые кислоты и предлагает множество преимуществ, таких как более высокая чувствительность, более высокая точность, более широкий динамический диапазон и требующее меньшего количества образцов.Микрочипы - еще один метод, используемый для обнаружения miRNA, основанный на чувствительной и специфической гибридизации miRNAs-мишеней с комплементарными зондами ДНК, 75 но анализ данных микрочипов требует много времени.
Сообщалось, что циркулирующие миР-122 и Let-7 потенциально полезны для диагностики ГЦК на ранней стадии в группах высокого риска, маркеров у пациентов с предраковыми узлами, связанными с ВГВ, и ГЦК на ранней стадии.76 Кай и др.обнаружили, что члены семейства Let-7 (миР-92, миР-122, миР-125b, миР-143, миР-192, миР-16, миР-126 и миР-199a/b) подвержены риску хронического ГЦК у больных гепатитом.Семейство Let-7 может служить эффективным суррогатным биомаркером для прогнозирования развития ГЦК в группах высокого риска, ассоциированного с хроническим гепатитом С. 77 miR-122 обладает высокой диагностической точностью при выявлении раннего ГЦК у пациентов с циррозом печени.78 МиР-107, циркулирующий в сыворотке, также оценивался на ранних стадиях ГЦК, 79 и показал хороший потенциал в группах высокого риска.Zhou et al. сообщили, что панель миРНК (миР-122, миР-192, миР-21, миР-223, миР-26а, миР-27а и миР-801) может дифференцировать ГЦК от хронического гепатита В (ХГВ) и цирроза печени. чувствительность составила 79,1% и 75%, а специфичность 76,4% и 91,1% соответственно.80 При HCC, связанном с HBV, мы обнаружили, что уровни miR150 были значительно снижены по сравнению с таковыми у пациентов с хроническим HBV без HCC (чувствительность 79,1%, специфичность 76,5%).-224 был повышен при ГЦК по сравнению со здоровыми людьми, а анализ подгрупп показал более высокие уровни у пациентов с ГЦК, ассоциированным с ВГВ.пациенты с циррозом печени, ассоциированным с гепатитом В, и пациенты с ГЦК идентифицировали классификатор миРНК, содержащий семь дифференциально экспрессируемых миРНК, которые могут обнаруживать ГЦК в различных контрольных группах;Диапазон AUC при раннем скрининге лучше, чем у добровольцев с ОВП.Они обнаружили, что четыре miRNAs (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p и miR-365a-3p) могут отличить пациентов с HCC от пациентов без HCC.Пять сверхэкспрессирующих миРНК (миР-122-5p, миР-125b-5p, миР-885-5p, миР-100-5p и миР-148a-3p) считаются потенциальными инфекциями HBV при ГЦК, циррозе и биомаркерах ХГВ, особенно миР-34a-5p могут быть биомаркерами цирроза печени,85 и могут быть потенциальными биомаркерами для раннего скрининга HCC в группах высокого риска.Наиболее изученная днРНК при ГЦК сильно активируется при раке печени (HULC).Другие исследования показали, что HULC, циркулирующий у пациентов с ГЦР, может использоваться в качестве диагностического маркера, поскольку эта днРНК сильно активируется у пациентов с ГЦР по сравнению со здоровыми людьми.71,86 Среди других lnRNA LINC00152 считается лучшей диагностической lncRNA из-за ее высокой AUC, чувствительности и специфичности.86 В одном исследовании экспрессия LINC00152 в периферической крови постепенно увеличивалась от нормального здорового контроля до пациентов с ХГВ и циррозом и, наконец, была самой высокой при ГЦК.Исследования экспрессии circSMARCA5 в плазме пациентов с ГЦК показали прогрессивное снижение экспрессии при ГЦК в диапазоне от гепатита до цирроза и предраковых поражений.87 Анализ ROC-кривых подтвердил потенциал этих кольцевых РНК в различении пациентов с гепатитом или циррозом печени от пациентов с ГЦК, особенно с уровнем АФП ниже 200 нг/мл.Кроме того, Zhu проанализировал 13 617 циклических РНК в образцах плазмы пациентов с HCC, ассоциированным с HBV, и подтвердил, что 6 циклических РНК по-разному экспрессировались при HCC и циррозе, ассоциированном с HBV, что позволяет предположить, что кРНК могут быть полезными.маркеры для раннего скрининга групп высокого риска, например, связанных с заболеваниями печени, больных склерозом.88
Экзосомы представляют собой мембранные везикулы диаметром 40–160 нм;множественные внутриклеточные везикулы сливаются с клеточной мембраной и высвобождаются во внеклеточный матрикс.Они содержат много активных компонентов, включая липиды, белки, РНК и ДНК, и играют ключевую роль в коммуникации между клетками, как клетками ГЦК, так и клетками, не являющимися ГЦК.89,90 Экзосомы регулируют прогрессирование ГЦК, активируя фибробласты гепатоцитов и звездчатые клетки, иммунные клетки, нормальные гепатоциты и клетки ГЦК.91 В микроокружении опухоли опухолевые клетки продуцируют большое количество экзосом, которые переносятся от раковых клеток к незрелым клеткам, которые, в свою очередь, участвуют в онкогенезе, деградации и клеточной передаче сигналов.92 Исследования показали, что экзосомы могут переносить онкогены в нормальные клетки при патологических процессах, что может быть одним из механизмов опухолевой инвазии и метастазирования.93 Роль экзосом в прогрессировании рака может быть динамичной и специфичной для типа рака, 89 Экзосомы могут быть интернализованы соседними или отдаленными клетками для регуляции множества генов-мишеней в клетках-реципиентах, которые могут быть вовлечены в межклеточную коммуникацию ионов и взаимодействие клеточного микроокружения, они могут опосредуют клеточную передачу сигналов и метаболизм.94 Характеристики и динамические изменения экзосомных грузовых молекул напрямую отражают характеристики и динамические изменения родительских опухолевых клеток,95 что также является основанием для использования экзосом в диагностике и прогнозе рака, а также для прогнозирования индивидуального ответа на противораковую терапию ..96
Традиционные лабораторные методы выделения и анализа экзосом сложны, многоступенчаты и требуют много времени, включая ультрацентрифугирование, фильтрацию, эксклюзионную хроматографию, иммуноаффинную очистку, Вестерн-блоттинг, твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), ПЦР и проточный анализ.миниатюрные системы и платформы «лаборатория на чипе», использующие микро/нанотехнологии, широко разрабатываются для быстрой и удобной изоляции экзосом in situ.Анализ отслеживания наночастиц (NTA) является широко используемым методом для характеристики размера и концентрации экзосом, включая такие методы, как магнитные наночастицы и полигидроксиалканоаты.Микрофлюидные и электрохимические методы также могут быстро обнаруживать экзосомы с высокими выходами.
Экзосомальные белки являются важными маркерами для диагностики ГЦК.В исследовании Arbelaiz уровень 98 RasGAP SH3-связывающего белка (G3BP) и полимерного рецептора иммуноглобулина (PIGR) был значительно повышен в экзосомах, полученных из HCC, и предполагаемая комбинированная эффективность двух белков превосходила эффективность АФП.Перегрузка железом является важным фактором, способствующим развитию ГЦК.Ценг сообщил, что гепсидин может играть ключевую роль в устойчивости к ГЦК.99 Экзосомы, полученные из сыворотки пациентов с ГЦК, имели значительно более высокое число копий вариантов мРНК гепсидина, чем их здоровые аналоги, что позволяет предположить, что гепсидин может быть новым диагностическим биомаркером для ГЦК.Белок 14-3-3ζ в экзосомах, продуцируемых 100 HCC, может снижать активацию, пролиферацию и дифференцировку Т-клеток и может индуцировать трансформацию Т-клеток в регуляторные Т-клетки, что приводит к истощению Т-клеток.101 Это подтверждается несколькими исследованиями, изучающими уклонение опухоли от иммунного надзора, 102 что может способствовать онкогенезу ГЦК.
В дополнение к наличию вкРНК в плазме или сыворотке экзосомы, обогащенные РНК, можно использовать для неинвазивного стадирования в реальном времени при раннем скрининге опухолей и для определения эволюции опухоли и ответа на терапию.Уровень экзосомальной миРНК-21 в сыворотке крови в группе ГЦК был в 2,21 раза выше, чем в группе ХГВ, а в группе ГЦК — в 5,57 раза выше, чем у здорового населения.В исследовании Wang экзосомы значительно увеличивали ГЦК по сравнению с пациентами с циррозом печени со значениями AUC 0,83 (95% ДИ 0,74–0,93) и 0,94 (95% ДИ 0,88–1,00).104 Полученные данные проясняют участие специфических экзосомальных грузовых молекул в регуляции онкогенеза и прогрессирования ГЦР.105 Экспрессия miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 и miR-26a в сыворотке является последовательной.и метастазы, а уровни miR21 были намного выше у пациентов с ГЦК, чем у здоровых людей, а также у пациентов с ХГВ.102 LncRNA имеет потенциальную диагностическую ценность при ГЦР.Исследования показали, что экзосомы, полученные из сыворотки пациентов с ГЦК, имеют значительно более высокие уровни LINC00161, LINC000635 и днРНК, активированных трансформирующим фактором роста-β, чем у пациентов без ГЦК, и эти днРНК тесно связаны со стадией TNM и объемом опухоли.110 Конильяро и др.Было обнаружено, что экзосомы CD90+ экспрессируют высокие уровни lncRNAH19, что значительно увеличивает высвобождение фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и продукцию рецептора VEGF-R1, тем самым стимулируя ангиогенез.93 CircRNAs представляют собой другой тип экзосомальных ncRNAs, которые экспрессируются на более низких, но стабильных уровнях у разных видов, circRNAs также проявляют специфичность в отношении типа клеток, типа ткани, стадии развития и регуляторной активности.111 circRNAs являются диагностическими биомаркерами раннего и минимально инвазивного рака.112 Недавние клинические испытания показали, что специфичность отдельных микроРНК в прогнозировании ГЦР не идеальна.Следовательно, комплексное обнаружение с использованием нескольких анализов (например, миР-122 и миР-48a в сочетании с АФП) может улучшить идентификацию ранней ГЦК и дифференциацию ГЦК от цирроза.100
Пациенты с ХГВ и циррозом печени являются наиболее распространенной группой высокого риска развития ГЦК.Для групп высокого риска после достижения устойчивого вирусологического ответа следует разработать экономически эффективную стратегию эпиднадзора, основанную на риске ГЦК, а ранний скрининг является ключом к улучшению диагностики и лечения ГЦК с высоким коэффициентом экономической эффективности2. ..Методы раннего скрининга рака имеют много ограничений: эффективные методы раннего скрининга не разработаны для большинства видов рака, а приверженность лечению обычно низкая.По сравнению с традиционными методами раннего скрининга технология жидкостной биопсии имеет очевидные преимущества: простота взятия образцов, обнаружение панрака, хорошая воспроизводимость образцов и эффективное реагирование на гетерогенность опухоли.Учитывая экономическую эффективность методов, связанных с жидкостной биопсией, их использование в скрининге ГЦК не проверялось в обычном порядке.Несмотря на успехи в точном обнаружении на молекулярном уровне, жидкостная биопсия является дорогостоящей для выявления ГЦР у целевых пациентов, что ограничивает ее широкое использование по сравнению с определенными методами визуализации, такими как ультразвуковое исследование и магнитно-резонансная томография.113,114 Однако предыдущее исследование показало, что жидкая биопсия продемонстрировала значительное преимущество с точки зрения количества лет жизни с поправкой на качество (QALY).115 Также были показаны преимущества жидкостной биопсии при раннем раке желудка и носоглотки.116,117 Текущая точка зрения состоит в том, что жидкая биопсия может дополнять сывороточные биомаркеры и рентгенологический скрининг при обнаружении и диагностике опухолей.117 118
Согласно современной литературе, технология жидкостной биопсии показала значительно более высокую чувствительность и специфичность при раннем скрининге групп высокого риска рака печени.Независимо от типа жидкостной биопсии, она может отличить ГЦК от лиц с высоким риском без ГЦК, что свидетельствует о важности раннего скрининга, поскольку различия между людьми с высоким риском и здоровыми очевидны.цтДНК имеет короткий период полураспада и может использоваться для выявления ГЦК, поэтому любые изменения в кДНК, полученной из опухоли, могут предоставить конкретные доказательства прогрессирования опухоли в режиме реального времени, особенно для небольших опухолей.Высокий уровень цДНК указывает на развитие и распространение рака и является ранним индикатором прогрессирования и рецидива.Кроме того, по результатам цтДНК пациенты могут получать индивидуальное лечение и последующее наблюдение.119 Специфические сайты метилирования могут быть лучшим маркером, чем АФП, для ранней идентификации ГЦК и цирротических узлов.В резектабельных случаях ГЦР высокие уровни кДНК указывают на микроваскулярную инвазию и послеоперационный рецидив и метастазирование.Изменения числа копий связаны с выживаемостью пациентов с ГЦК.Можно предположить, что оценка кДНК может быть вовлечена в общее лечение ГЦК, а кДНК может служить эффективным индикатором терапевтической модуляции.Маркеры, основанные на специфических генетических мутациях в ctDNA, были приняты клиническими руководствами для прогнозирования эффективности и мониторинга лекарственной устойчивости.Тестирование ctDNA может быть наиболее полезным инструментом жидкой биопсии для раннего скрининга.ЦОК также играют ключевую роль в раннем скрининге групп высокого риска ГЦК.Различные маркеры ЦОК, ассоциированных с ГЦК, имеют особое значение в возникновении, развитии и рецидиве ГЦК.В качестве мембранных везикул экзосомы участвуют в межклеточных коммуникациях, особенно в клетках ГЦР.Циркулирующие микроРНК стабильны в крови и, таким образом, могут быть более полезными для раннего скрининга ГЦК.Постепенно были обнаружены экзосомальные белки и экзосомы, богатые РНК, и была подтверждена их прогностическая эффективность в отношении ГЦК.Интересно, что разная этиология ГЦР может также быть связана с разными мутациями, поэтому мы можем выбирать разные биомаркеры для раннего скрининга на основе разной этиологии ГЦК.120
Однако современные методы жидкостной биопсии сомнительны с точки зрения стабильности и не могут самостоятельно выполнять ранний скрининг или мониторинг ГЦК, но все же могут дополнять индивидуальный скрининг и диагностику.121 В качестве формы жидкой биопсии обнаружение и визуализация ctDNA, CTC, cfRNA и экзосом-ассоциированного AFP или PIVKA-II имеют многообещающие применения в ранней диагностике и прогнозировании ГЦК.Однако точный механизм выброса ctDNA в кровь еще предстоит выяснить.Выявление основных биологических свойств цтДНК может облегчить ее использование в качестве маркера.Небольшое количество кДНК в кровотоке и строгие требования к обращению с образцами являются проблемами для клинической реализации обнаружения кДНК при ГЦР.Кроме того, генетические мутации не имеют специфических признаков, позволяющих точно идентифицировать канцерогены.Поскольку множественные генетические и соматические варианты также присутствуют в нормальных тканях, генетические мутации, идентифицированные с помощью жидкостной биопсии, могут иметь ограниченную пользу при раннем скрининге ГЦК.122 Ограничения четко определенных полезных генов-мишеней и биомаркеров, которые помогают дифференцировать кДНК от неопухолевой ДНК, являются наиболее важными проблемами при использовании кДНК.отсутствие полезности чувствительных и специфических маркеров для обнаружения ЦОК.Были обнаружены только жизнеспособные клетки с метастатическим потенциалом, а оптимальная комбинация маркеров, обогащенных РСК, была неясна.Выделение ЦОК для культуры и оценка их мутационных профилей также является сложной задачей.Из-за проблем с идентификацией, выделением и очисткой экзосом конкретный молекулярный механизм до сих пор неясен, а предыдущие исследования механизма экзосом и ГЦК не были углубленными, а также того, как микроРНК, днРНК и белки сортируются в экзосомы. , и неясно, является ли поглощение экзосом процессом особого типа.Использование экзосом для диагностики и лечения ГЦК все еще находится на доклинической стадии.Отсутствие стандартизации процедур жидкой биопсии, таких как тип пробирок, используемых для сбора крови, объем крови, хранение и обнаружение образцов, изоляция и обогащение, может препятствовать их использованию в рутинной клинической практике из-за различий в практике разных медицинских центров.Эффективность жидкостной биопсии в раннем скрининге, диагностике, оценке эффективности и прогнозировании ГЦК еще предстоит изучить, особенно для групп высокого риска.Технология жидкостной биопсии имеет большой потенциал и, как ожидается, в ближайшем будущем найдет широкое применение в клинической практике рака печени.
1. Сунг Х., Ферли Дж., Сигел Р.Л. и соавт.Глобальная статистика рака 2020: GLOBOCAN оценивает заболеваемость и смертность от 36 видов рака в 185 странах.CA Рак J Clin.2021;71(3):209-249.дои: 10.3322/caac.21660
2. Штаб-квартира Национальной комиссии здравоохранения.Критерии диагностики и лечения первичного рака печени (издание 2022 г.) [J].Журнал клинических заболеваний печени, 2022 г., 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Чжоу Дж., Сунь Х., Ван Цзи и др.Руководство по диагностике и лечению гепатоцеллюлярной карциномы (издание 2019 г.).Рак печени.2020;9(6):682-720.дои: 10.1159/000509424
4. Кокудо Н., Такемура Н., Хасэгава К. и др.Клинические практические рекомендации по гепатоцеллюлярной карциноме: Японское общество болезней печени, 2017 г. (4-е руководство JSH-HCC), обновление 2019 г.Резервуар заболеваний печени.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Баррера-Салдана Х.А., Фернандес-Гарза Л.Е., Баррера-Баррера С.А. Жидкая биопсия при хроническом заболевании печени.Энн Хепато.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Тай Т.К.Ю., Тан П.Х.Жидкая биопсия рака молочной железы: целенаправленный обзор.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Канвал Ф., Сингал А.Г. Наблюдение за гепатоцеллюлярной карциномой: передовой опыт и направления на будущее.Гастроэнтерология.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. Европейская исследовательская ассоциация L, Европейская организация R, C Therapeutics.Клинические рекомендации EASL-EORTC: лечение гепатоцеллюлярной карциномы.J Гепарин.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Чжан Г., Ха С.А., Ким Х.К. и др.Комбинированный анализ AFP и HCCR-1 в качестве полезных серологических маркеров при небольшой гепатоцеллюлярной карциноме: проспективное когортное исследование.Дис Марк.2012;32(4):265–271.дои: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Чен С., Чен Х., Гао С. и др.Дифференциальная экспрессия микроРНК-125b плазмы при заболевании печени, ассоциированном с вирусом гепатита В, и диагностический потенциал гепатоцеллюлярной карциномы, вызванной вирусом гепатита В.Резервуар заболевания печени.2017;47(4):312-320.дои: 10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Биология и значение альфа-фетопротеина при гепатоцеллюлярной карциноме.Печень внутр.2019;39(12):2214–2229.дои: 10.1111/liv.14223
12. Омата М., Ченг А.Л., Кокудо Н. и др.Клинические рекомендации по лечению гепатоцеллюлярной карциномы в Азиатско-Тихоокеанском регионе: обновление 2017 г.Международная организация по заболеваниям печени.2017;11(4):317–370.дои: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Сюй Фей, Чжан Ли, Хэ Вэй и др.Диагностическая ценность PIVKA-II в сыворотке отдельно или в сочетании с АФП у китайских пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой.Дис Марк.2021;2021:8868370.дои: 10.1155/2021/8868370
14. Дурин Л., Прарадинес А., Бассет С. и соавт.Биопсия неплазменной гуморальной жидкости при немелкоклеточном раке легкого: ближе к опухоли!клетка.2020;9(11).дои: 10.3390/cells9112486
15. Мадер С., Пантель К. Жидкая биопсия: текущее состояние и перспективы на будущее.Лечение Онкол Рез.2017;40(7-8):404-408.дои: 10.1159/000478018
16. Пальмиротта Р., Ловеро Д., Каффорио П. и др.Жидкостная биопсия рака: мультимодальный диагностический инструмент в клинической онкологии.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.дои: 10.1177/1758835918794630
17. Мандель П., Метаис П. Нуклеиновые кислоты в плазме крови человека.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Усовершенствованное обнаружение циркулирующей опухолевой ДНК с помощью анализа размера фрагмента.Наука переводит медицину.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Длина фрагмента циркулирующей опухолевой ДНК.PLOS-гены.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Циркулирующая опухолевая ДНК: многообещающий биомаркер в жидкостной биопсии рака.целевая опухоль.2016;7(30):48832–48841.doi: 10.18632/oncotarget.9453
21. Беттеговда С., Саузен М., Лири Р.Дж. и соавт.Обнаружение циркулирующей опухолевой ДНК на ранних и поздних стадиях злокачественных новообразований человека.Наука переводит медицину.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Мехес Г. Жидкая биопсия для мутационного прогностического анализа солидного рака: точка зрения патологоанатома.Дж Биотехнология.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Ленартс Л., Тувери С., Яценко Т. и соавт.Раннее обнаружение опухоли с помощью скрининга ДНК циркулирующей плазмы: шумиха или надежда?Бельгийское клиническое право.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Нисида Н. Влияние вируса гепатита и старения на метилирование ДНК в гепатоканцерогенезе человека.Гистопатология.2010;25(5):647–654.дои: 10.14670/HH-25.647